小弟現在在做脂肪肝的細胞模式(HepG2) 理論上 當游離脂肪酸的供給濃度增加而導致胞內脂肪堆積增加(dose-dependent) -> Gomez Lechon-2007 也可能隨時間而增加累積量(time-dependent) -> 肉眼觀察 我可以使用Oil Red O或Nile Red作出phase-contrast或螢光相片 也有感覺累積量有明顯差異 但是我卻沒辦法很正確且穩定地對它定量 以下是我曾經操作過的方法 1.利用Oil Red O染色退染後 將細胞內的染劑再溶出後析光分析 (穩定 但是顯著性不足) 2.以Nile Red染色後用flow cytometry分析 (因為Ex549/Em599, 但是校內只有488, 雖然Jara-2003曾指出可以Ex488/Em560-640 + Em650-可以分析 但是我的結果一直很不穩定 連positive也看不見顯著增多) 3.以lipase-based方式 (Pointe Scientific,Triglyceride(GPO)(Liquid)Reagent Set) 先低張液配合反覆冷凍取得lysate後,定量的lysate混合methanol/chloroform(1:2) 室溫轉隔夜後取有機層 抽氣乾燥 以小體積絕對酒精回溶 然後加入TG試劑測濃度 結果也沒辦法穩定呈現理論值 顯著性也不高 因為我將來要用分析某些cytokine甚至於天然萃取物是否能減低脂質堆積 所以必須有一個穩定的量化方式以提供佐證 特此請教各位先進 關於上述三種方法有沒有什麼經驗可以分享 或者還有其他建議方法 (isotope我確定不會利用.HPLC可能也還沒辦法支持..) 感謝 --

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