小弟现在在做脂肪肝的细胞模式(HepG2) 理论上 当游离脂肪酸的供给浓度增加而导致胞内脂肪堆积增加(dose-dependent) -> Gomez Lechon-2007 也可能随时间而增加累积量(time-dependent) -> 肉眼观察 我可以使用Oil Red O或Nile Red作出phase-contrast或萤光相片 也有感觉累积量有明显差异 但是我却没办法很正确且稳定地对它定量 以下是我曾经操作过的方法 1.利用Oil Red O染色退染後 将细胞内的染剂再溶出後析光分析 (稳定 但是显着性不足) 2.以Nile Red染色後用flow cytometry分析 (因为Ex549/Em599, 但是校内只有488, 虽然Jara-2003曾指出可以Ex488/Em560-640 + Em650-可以分析 但是我的结果一直很不稳定 连positive也看不见显着增多) 3.以lipase-based方式 (Pointe Scientific,Triglyceride(GPO)(Liquid)Reagent Set) 先低张液配合反覆冷冻取得lysate後,定量的lysate混合methanol/chloroform(1:2) 室温转隔夜後取有机层 抽气乾燥 以小体积绝对酒精回溶 然後加入TG试剂测浓度 结果也没办法稳定呈现理论值 显着性也不高 因为我将来要用分析某些cytokine甚至於天然萃取物是否能减低脂质堆积 所以必须有一个稳定的量化方式以提供佐证 特此请教各位先进 关於上述三种方法有没有什麽经验可以分享 或者还有其他建议方法 (isotope我确定不会利用.HPLC可能也还没办法支持..) 感谢 --

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