※ 引述《[email protected] (Koilocytosis)》之銘言： : 實驗方法 : 3x10^6個細胞以200uM, 500uM, 1mM H2O2處理六小時 : (paper上說可誘發凋亡, 也可見到DNA ladder) : 用TRI reagent抽DNA (方法:http://www.mrcgene.com/tri.htm). : 最後加入20uL水將DNA回溶, : 但因前一步驟的酒精沒有揮發的很完全, 所以總溶液體積約為40-60uL : 取一半(30uL)樣品, 加上dye混合之後就跑1.2%瓊脂電泳 : 實驗結果 : 之前用這方法抽DNA所測出OD約為1.4-1.7 : 在1200bp上方(也就是分子量>1200bp)有兩條band, 下方則是很淡smear的樣子. : 我的問題 : 我想請問版上是否有高手用過TRI reagent抽DNA, 並觀察其DNA ladder情形呢? : 我不曉得是DNA沒抽成功呢? 還是每個well放的量太少, 所以看不到ladder的樣子呢 : 麻煩請版上高手為我解惑呀!! 感激不盡! ^^* ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 1.經驗上跟cell type有很大的關係..有些cell跑出來的pattern很容易是smear-like, 不過這在發表時是可以被接受的. 2.你有測純度..那應該也同時有測濃度吧..所以你的loading量是多少呢?? or more information about your running condition..? 3.H2O2的保存是老問題..它常常因保存不好而不work..有確定H2O2是ok的嗎?? or 能造成DNA ladder的試劑很多,是否可能用其他reagent來induce? -- ╭──── Origin:<不良牛牧場> bbs.badcow.com.tw (210.200.247.200)─────╮ │ ↘ Welcome to SimFarm BBS -- From : [211.76.173.247] │ ╰◣◣◢ ◢◢《不良牛免費撥接→電話:40586000→帳號:zoo→密碼:zoo》 ◣◣◢ ─╯