※ 引述《[email protected] (Koilocytosis)》之铭言： : 实验方法 : 3x10^6个细胞以200uM, 500uM, 1mM H2O2处理六小时 : (paper上说可诱发凋亡, 也可见到DNA ladder) : 用TRI reagent抽DNA (方法:http://www.mrcgene.com/tri.htm). : 最後加入20uL水将DNA回溶, : 但因前一步骤的酒精没有挥发的很完全, 所以总溶液体积约为40-60uL : 取一半(30uL)样品, 加上dye混合之後就跑1.2%琼脂电泳 : 实验结果 : 之前用这方法抽DNA所测出OD约为1.4-1.7 : 在1200bp上方(也就是分子量>1200bp)有两条band, 下方则是很淡smear的样子. : 我的问题 : 我想请问版上是否有高手用过TRI reagent抽DNA, 并观察其DNA ladder情形呢? : 我不晓得是DNA没抽成功呢? 还是每个well放的量太少, 所以看不到ladder的样子呢 : 麻烦请版上高手为我解惑呀!! 感激不尽! ^^* ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 1.经验上跟cell type有很大的关系..有些cell跑出来的pattern很容易是smear-like, 不过这在发表时是可以被接受的. 2.你有测纯度..那应该也同时有测浓度吧..所以你的loading量是多少呢?? or more information about your running condition..? 3.H2O2的保存是老问题..它常常因保存不好而不work..有确定H2O2是ok的吗?? or 能造成DNA ladder的试剂很多,是否可能用其他reagent来induce? -- ╭──── Origin:<不良牛牧场> bbs.badcow.com.tw (210.200.247.200)─────╮ │ ↘ Welcome to SimFarm BBS -- From : [211.76.173.247] │ ╰◣◣◢ ◢◢《不良牛免费拨接→电话:40586000→帐号:zoo→密码:zoo》 ◣◣◢ ─╯