作者tonbushai (許小黑~)
看板Biotech
標題[問題] 抽RNA後的回溶~
時間Tue Aug 21 03:08:52 2007
我的RNA sample抽完之後~~放在HOOD裡面~~
風乾~大約3個小時有吧 (爬文有看見好像只要5分鐘)
透明後~加入30ul的DEPC-H2O回溶後~~冰在-80度C
三天後想說轉RT成ssDNA
可是卻發現我的RNA sample幾乎每一管都有~透明黏稠物~吸到TIP都會經常卡住~
那應該是RNA吧~是我沒有回溶好嗎??~
那應該如何回溶~??又應該如何避免此種情形??
之後我用手一直彈一直彈也很難回溶~~(不敢VOTEX)
是因為風乾太久了嗎???
我一直認為他應該就是RNA的pellete(感覺好像拼錯>.<)
因為我測完濃度發現~黏稠物較少的濃度測出來~似乎會比較高~~所以一直認是RNA
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請有經驗的版友教導一下謝謝~~
還有我用細胞用6cm dish培養~加入1cc REzol~來收的~
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◆ From: 59.113.128.237
1F：推 sisyphus:應該是可以重抽了~~風乾前盡可能把酒精吸掉的話 08/21 13:04
2F：→ sisyphus:頂多五分鐘就乾到爆表了 08/21 13:04
3F：推 zselon:樓上說的沒錯~ 不用風乾太久.. 08/21 16:29
4F：→ zselon:之前也曾經乾太久..加一堆 DEPC 水 08/21 16:33
5F：→ zselon:外加 vortex 快半小時...還是不溶 = = 08/21 16:35
6F：推 sisyphus:原PO抽的應該已經乾過頭了~~3小時~~溶的了應該也沒辦法用 08/21 16:42
7F：→ sisyphus:重抽比較快QQ 08/21 16:44
8F：推 tonbushai:不過我還是繼續測好RNA濃度之後～取1ug跑完RT了~ 08/21 18:48
9F：推 tonbushai:測完的ssDNA濃度都很平均1.65ug/ul左右～ 08/21 18:52
10F：→ tonbushai:這樣我的檢體會有問題媽？？ 08/21 18:53
11F：推 sisyphus:這就要扯到分生第一定律了 08/21 19:21
12F：→ sisyphus:"有結果就是對的方法" 08/21 19:21
13F：→ sisyphus:不過RT之後測DNA濃度不太準,還是先往下做吧 08/21 19:22
14F：→ sisyphus:抽乾時間短一點 量多質好 就算最後沒有結果也比較不心需딠 08/21 19:23
15F：→ tonbushai:我怕的就是RNA沒有均勻溶解`所以我所測到的濃度的RNA~ 08/21 21:23
16F：→ tonbushai:是比較容易溶解的RNA~例如一些長度比較短的RNA會先溶解꜠ 08/21 21:25
17F：→ tonbushai:這樣我RT轉出來的`並非是均勻基因的RNA~而是某些特定的 08/21 21:26