作者tonbushai (许小黑~)
看板Biotech
标题[问题] 抽RNA後的回溶~
时间Tue Aug 21 03:08:52 2007
我的RNA sample抽完之後~~放在HOOD里面~~
风乾~大约3个小时有吧 (爬文有看见好像只要5分钟)
透明後~加入30ul的DEPC-H2O回溶後~~冰在-80度C
三天後想说转RT成ssDNA
可是却发现我的RNA sample几乎每一管都有~透明黏稠物~吸到TIP都会经常卡住~
那应该是RNA吧~是我没有回溶好吗??~
那应该如何回溶~??又应该如何避免此种情形??
之後我用手一直弹一直弹也很难回溶~~(不敢VOTEX)
是因为风乾太久了吗???
我一直认为他应该就是RNA的pellete(感觉好像拼错>.<)
因为我测完浓度发现~黏稠物较少的浓度测出来~似乎会比较高~~所以一直认是RNA
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请有经验的版友教导一下谢谢~~
还有我用细胞用6cm dish培养~加入1cc REzol~来收的~
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◆ From: 59.113.128.237
1F：推 sisyphus:应该是可以重抽了~~风乾前尽可能把酒精吸掉的话 08/21 13:04
2F：→ sisyphus:顶多五分钟就乾到爆表了 08/21 13:04
3F：推 zselon:楼上说的没错~ 不用风乾太久.. 08/21 16:29
4F：→ zselon:之前也曾经乾太久..加一堆 DEPC 水 08/21 16:33
5F：→ zselon:外加 vortex 快半小时...还是不溶 = = 08/21 16:35
6F：推 sisyphus:原PO抽的应该已经乾过头了~~3小时~~溶的了应该也没办法用 08/21 16:42
7F：→ sisyphus:重抽比较快QQ 08/21 16:44
8F：推 tonbushai:不过我还是继续测好RNA浓度之後～取1ug跑完RT了~ 08/21 18:48
9F：推 tonbushai:测完的ssDNA浓度都很平均1.65ug/ul左右～ 08/21 18:52
10F：→ tonbushai:这样我的检体会有问题妈？？ 08/21 18:53
11F：推 sisyphus:这就要扯到分生第一定律了 08/21 19:21
12F：→ sisyphus:"有结果就是对的方法" 08/21 19:21
13F：→ sisyphus:不过RT之後测DNA浓度不太准,还是先往下做吧 08/21 19:22
14F：→ sisyphus:抽乾时间短一点 量多质好 就算最後没有结果也比较不心需딠 08/21 19:23
15F：→ tonbushai:我怕的就是RNA没有均匀溶解`所以我所测到的浓度的RNA~ 08/21 21:23
16F：→ tonbushai:是比较容易溶解的RNA~例如一些长度比较短的RNA会先溶解꜠ 08/21 21:25
17F：→ tonbushai:这样我RT转出来的`并非是均匀基因的RNA~而是某些特定的 08/21 21:26