※ 引述《[email protected] (三跪九扣三跪九叩)》之銘言： > 大家好 > 最近我在做Western時 > 常常配的gel都不會凝 > 有的時候要放一個多小時 > 有的放o/n都不行 > 我有很小心注意我的配方 > 都沒有漏加什麼東西 > 但就是時凝時不凝 > 跟mix的力道有關係嗎 > 會因為votex太猛烈造成不凝嗎? > 配10mL膠時 我的10%APS 和 TEMED 各加了0.1mL & 0.01mL > 架膠玻片我也洗過再用酒精噴過擦乾 > 還有~配膠時Acrylamide剛從冰箱拿出就可以用 還是要回室溫? > 因為同實驗室也有人用同一套藥品配 都沒問題 > 我做western做了一兩百片了 最近就常常鬼擋牆 > 實在找不到原因 > 有什麼我沒注意到的嗎 膠不凝 第一個直覺是 APS 不過實際上可能要看不同實驗室的習慣 比方說我以前呆的實驗室 鑄膠的藥品都是公用的 但是 APS 是配好分裝成小管冰起來 要用的人從公用區拿一管 用過一次以後就自己保管 碰到不凝的時候 第一個猜想就是自己的 APS 掛掉了 當然 如果最近新配了什麼藥品然後大家的膠都不凝 那就要懷疑是別的東西掛了 > 還有 > 我是在sample都快準備好才發現膠凝的很差 > 上面凝了但下緣化掉成凹凸不平 猜測是鑄膠的各種成分混合不均 > 請問加了水和 sample buffer 未煮過的蛋白 > 可以留著隔天用嗎 > 可以放多久 > 放四度冰箱還是負20?? > 非常感謝!! 除非是特別不穩定的蛋白質 一般來說放負二十就可以保存很久很久 western sample 的保存 個人認為沒有任何道理放 4C -- 莫非定律: 到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上 補充定律: 拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考 -- ※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: adsl-76-241-77-15.dsl.bcvloh.sbcglobal.net