※ 引述《[email protected] (三跪九扣三跪九叩)》之铭言： > 大家好 > 最近我在做Western时 > 常常配的gel都不会凝 > 有的时候要放一个多小时 > 有的放o/n都不行 > 我有很小心注意我的配方 > 都没有漏加什麽东西 > 但就是时凝时不凝 > 跟mix的力道有关系吗 > 会因为votex太猛烈造成不凝吗? > 配10mL胶时 我的10%APS 和 TEMED 各加了0.1mL & 0.01mL > 架胶玻片我也洗过再用酒精喷过擦乾 > 还有~配胶时Acrylamide刚从冰箱拿出就可以用 还是要回室温? > 因为同实验室也有人用同一套药品配 都没问题 > 我做western做了一两百片了 最近就常常鬼挡墙 > 实在找不到原因 > 有什麽我没注意到的吗 胶不凝 第一个直觉是 APS 不过实际上可能要看不同实验室的习惯 比方说我以前呆的实验室 铸胶的药品都是公用的 但是 APS 是配好分装成小管冰起来 要用的人从公用区拿一管 用过一次以後就自己保管 碰到不凝的时候 第一个猜想就是自己的 APS 挂掉了 当然 如果最近新配了什麽药品然後大家的胶都不凝 那就要怀疑是别的东西挂了 > 还有 > 我是在sample都快准备好才发现胶凝的很差 > 上面凝了但下缘化掉成凹凸不平 猜测是铸胶的各种成分混合不均 > 请问加了水和 sample buffer 未煮过的蛋白 > 可以留着隔天用吗 > 可以放多久 > 放四度冰箱还是负20?? > 非常感谢!! 除非是特别不稳定的蛋白质 一般来说放负二十就可以保存很久很久 western sample 的保存 个人认为没有任何道理放 4C -- 莫非定律: 到了期末才会想起期初曾选了一门课却一直没去上 补充定律: 拿到成绩单才发现上了一学期的课忘了去考期末考 -- ※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: adsl-76-241-77-15.dsl.bcvloh.sbcglobal.net