作者tirecake (三跪九扣三跪九叩)
看板Biotech
標題[問題] 我的WESTERN膠出現問題了~&蛋白保存
時間Mon Aug 13 10:03:37 2007
大家好
最近我在做Western時
常常配的gel都不會凝
有的時候要放一個多小時
有的放o/n都不行
我有很小心注意我的配方
都沒有漏加什麼東西
但就是時凝時不凝
跟mix的力道有關係嗎
會因為votex太猛烈造成不凝嗎?
配10mL膠時 我的10%APS 和 TEMED 各加了0.1mL & 0.01mL
架膠玻片我也洗過再用酒精噴過擦乾
還有~配膠時Acrylamide剛從冰箱拿出就可以用 還是要回室溫?
因為同實驗室也有人用同一套藥品配 都沒問題
我做western做了一兩百片了 最近就常常鬼擋牆
實在找不到原因
有什麼我沒注意到的嗎
還有
我是在sample都快準備好才發現膠凝的很差
上面凝了但下緣化掉成凹凸不平
請問加了水和sample buffer 未煮過的蛋白
可以留著隔天用嗎
可以放多久
放四度冰箱還是負20??
非常感謝!!
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Digest those memories of him from my heart with trypsin,
and store in LN2 bottle forever.
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.100
1F：推 snkre:可能是APS有問題... 08/13 10:23
2F：推 tankcase:同上,APS問題很大. 請新鮮製備吧! 另外,sample buffer+st 08/13 15:56
3F：→ tankcase:sample buferr加了之後就直接denature吧.會安心的多^^ 08/13 15:59
4F：推 tirecake:感謝~我的APS都是現秤現配~懷疑是powder四年用不完變質了 08/14 09:54
5F：推 CLDER:我實驗室的AP粉末水解嚴重 =>膠不凝 ==.== 08/14 22:56
6F：推 shunze:我們把APS放進防潮箱,配完之後過濾滅菌分裝冰在-20,可以撐 08/16 13:25
7F：→ shunze:很久 08/16 13:26
8F：推 kalfan1:我也都配好放-20 05/08 01:41