作者tirecake (三跪九扣三跪九叩)
看板Biotech
标题[问题] 我的WESTERN胶出现问题了~&蛋白保存
时间Mon Aug 13 10:03:37 2007
大家好
最近我在做Western时
常常配的gel都不会凝
有的时候要放一个多小时
有的放o/n都不行
我有很小心注意我的配方
都没有漏加什麽东西
但就是时凝时不凝
跟mix的力道有关系吗
会因为votex太猛烈造成不凝吗?
配10mL胶时 我的10%APS 和 TEMED 各加了0.1mL & 0.01mL
架胶玻片我也洗过再用酒精喷过擦乾
还有~配胶时Acrylamide刚从冰箱拿出就可以用 还是要回室温?
因为同实验室也有人用同一套药品配 都没问题
我做western做了一两百片了 最近就常常鬼挡墙
实在找不到原因
有什麽我没注意到的吗
还有
我是在sample都快准备好才发现胶凝的很差
上面凝了但下缘化掉成凹凸不平
请问加了水和sample buffer 未煮过的蛋白
可以留着隔天用吗
可以放多久
放四度冰箱还是负20??
非常感谢!!
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Digest those memories of him from my heart with trypsin,
and store in LN2 bottle forever.
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.64.247.100
1F：推 snkre:可能是APS有问题... 08/13 10:23
2F：推 tankcase:同上,APS问题很大. 请新鲜制备吧! 另外,sample buffer+st 08/13 15:56
3F：→ tankcase:sample buferr加了之後就直接denature吧.会安心的多^^ 08/13 15:59
4F：推 tirecake:感谢~我的APS都是现秤现配~怀疑是powder四年用不完变质了 08/14 09:54
5F：推 CLDER:我实验室的AP粉末水解严重 =>胶不凝 ==.== 08/14 22:56
6F：推 shunze:我们把APS放进防潮箱,配完之後过滤灭菌分装冰在-20,可以撑 08/16 13:25
7F：→ shunze:很久 08/16 13:26
8F：推 kalfan1:我也都配好放-20 05/08 01:41