作者aljkpyy (hihi)
看板Biotech
標題[問題]關於要做長片段的PCR
時間Mon Jul 16 15:15:56 2007
大家好~
最近我在做長片段的PCR(4.38 kb)
已經試做過幾次了 不過 都沒有P到任何片段(連雜band都沒有)
想請問版上的大家 有沒有比較推薦 可以用在增幅5kb(或以上)的DNA polymerase
我現在是用Taq XL
我的PCR condition如下
cDNA 3 ul
10X buffer 5 ul
primer-f 1.5 ul
primer-r 1.5 ul
10mM dNTP 3 ul
Taq XL 0.5 ul
DDW 35.5 ul
--------------------------------
total 50 ul
PCR cycle condition
94度 5 min
94度 30s --> denature
58度 30s --> annealing
68度 5 min --> extension
72度 10 min
35 cycle
請問做這種長片段PCR時 酵素是否夠力撐完全程 需不需要在半途補充酵素
希望各位高手能給我一些意見 先謝謝大家了~
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.208.19
1F：推 wangba:cDNA濃度?primer濃度? 可以試著把annealing時間增加到45s 07/16 18:23
2F：推 wangba:我有用stratagene的pfu ultra P過近6K 參考看看 07/16 18:26
3F：推 KIKO880:pfu ultra的真的做比較長，我的也是用那個做出來 07/18 22:04