作者aljkpyy (hihi)
看板Biotech
标题[问题]关於要做长片段的PCR
时间Mon Jul 16 15:15:56 2007
大家好~
最近我在做长片段的PCR(4.38 kb)
已经试做过几次了 不过 都没有P到任何片段(连杂band都没有)
想请问版上的大家 有没有比较推荐 可以用在增幅5kb(或以上)的DNA polymerase
我现在是用Taq XL
我的PCR condition如下
cDNA 3 ul
10X buffer 5 ul
primer-f 1.5 ul
primer-r 1.5 ul
10mM dNTP 3 ul
Taq XL 0.5 ul
DDW 35.5 ul
--------------------------------
total 50 ul
PCR cycle condition
94度 5 min
94度 30s --> denature
58度 30s --> annealing
68度 5 min --> extension
72度 10 min
35 cycle
请问做这种长片段PCR时 酵素是否够力撑完全程 需不需要在半途补充酵素
希望各位高手能给我一些意见 先谢谢大家了~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.208.19
1F：推 wangba:cDNA浓度?primer浓度? 可以试着把annealing时间增加到45s 07/16 18:23
2F：推 wangba:我有用stratagene的pfu ultra P过近6K 参考看看 07/16 18:26
3F：推 KIKO880:pfu ultra的真的做比较长，我的也是用那个做出来 07/18 22:04