作者linwei (我會好好加油^^)
看板Biotech
標題[問題] 關於蛋白質定量法?!
時間Wed Jul 11 21:11:44 2007
恩 我想請問一下
做蛋白質定量的時候
使用 Bradford method 其中 Dye 的多寡會影響到OD值嗎?
其實是我有同學最近在做這個
實驗方法是 10ul的BSA + 190ul 的Dye
然後同時做兩組
操作的順序如下:
濃度1.0(mg/ml) 的BSA 第一組加完 後加第二組
濃度0.8(mg/ml) 的BSA 第一組加完 後加第二組
.
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然後八個濃度兩組都加完後
使用八爪 (這個酷，我還沒用過@@) 一整組一起加入 Dye
然後跑完OD值後很神奇的....
第一組一整組的數值都偏高 @@ (八個數值都比第二組高)
可是很奇怪耶 兩組的BSA是來自同一次稀釋的....
她問我為什麼會這樣的時候，我也覺得很神奇
因為我覺得OD值不是應該和蛋白質濃度比較有關係嗎??
或者純粹巧合? (也太巧了...Otz)
其實拉哩拉雜打這麼多字...只是想請問
OD值和Dye的多寡有沒有關係?
如果有它的原理是什麼呢??
謝謝大家看完我的問題 Otz
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◆ From: 218.170.2.190
※ 編輯: linwei 來自: 218.170.2.190 (07/11 21:12)
1F：推 rangelovero:你的dye不是都加一樣的量嗎 那就沒關係吧 07/12 15:13
2F：→ rangelovero:雖然有點看不太懂~但第一組OD普遍比第二組高 可能操作 07/12 15:13
3F：→ rangelovero:速度不夠快 讓兩排反應時間差太多而造成 07/12 15:14
4F：推 linwei:嗯嗯 對後 沒想到反應時間... 07/12 15:44
5F：推 linwei:那..Dye的多寡會影響嗎?(即使只差5ul這麼微量..)如果會它原 07/12 15:46
6F：→ linwei:裡是什麼呢?? 謝謝你的回答 <(_ _)> 07/12 15:47
※ 編輯: linwei 來自: 218.170.2.114 (07/12 15:49)
7F：推 rangelovero:我覺得應該不會吧 主要和蛋白質量有關係~但是若過量 07/12 17:37
8F：→ rangelovero:本身的紅棕色是否會影響就不清楚了! 最簡單的方法就是 07/12 17:39
9F：→ rangelovero:自己作測試= =" 其實買來的kit應該都會寫要加多少dye 07/12 17:39
10F：→ rangelovero:一般人都會乖乖照protocol,如果真的好奇就test一下吧 07/12 17:41
11F：推 puh1005:光看你的文就覺得你對濃度跟量很沒有sense... 07/12 18:41
12F：→ puh1005:Dye沒有濃度(一般會稀釋), 1000ul蛋白不是濃度 07/12 18:42
13F：推 linwei:呵 多謝樓上的指教 我錯了^^" ꨠ 07/12 20:04
14F：推 linwei:然後我也清楚Dye買回來都會稀釋..這樣又讓我多一問題了@@ 07/12 20:08
15F：推 linwei:不同濃度的Dye (就是稀釋濃度不一樣) 下去做兩組對照後... 07/12 20:11
16F：→ linwei:這兩組的吸光值會一樣嗎??(前提是兩組的BSA都相同的濃度喔 07/12 20:12
17F：推 linwei:且加的Dye量也相同喲@@ ) 07/12 20:13
※ 編輯: linwei 來自: 140.128.68.249 (07/12 20:40)
18F：推 puh1005:當然不會一樣囉~ 任何測定都有適合的範圍,可以自己試試呀 07/12 22:19
19F：→ puh1005:前提是檢量線的做法也要一樣,且要用同一批稀釋的dye 07/12 22:21
20F：→ puh1005:測定的時間也要相同,太久的話蛋白會開始變性沉澱 07/12 22:22
21F：→ puh1005:另外,不要太相信八爪,除非你對自己用pipetman很有自信 07/12 22:23
22F：推 linwei:感謝您的回答 :D 有機會希望可以自己試試..(怕有時實驗室 07/12 23:39
23F：→ linwei:器材很貴不敢亂試 Otz..) 07/12 23:39