作者linwei (我会好好加油^^)
看板Biotech
标题[问题] 关於蛋白质定量法?!
时间Wed Jul 11 21:11:44 2007
恩 我想请问一下
做蛋白质定量的时候
使用 Bradford method 其中 Dye 的多寡会影响到OD值吗?
其实是我有同学最近在做这个
实验方法是 10ul的BSA + 190ul 的Dye
然後同时做两组
操作的顺序如下:
浓度1.0(mg/ml) 的BSA 第一组加完 後加第二组
浓度0.8(mg/ml) 的BSA 第一组加完 後加第二组
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然後八个浓度两组都加完後
使用八爪 (这个酷，我还没用过@@) 一整组一起加入 Dye
然後跑完OD值後很神奇的....
第一组一整组的数值都偏高 @@ (八个数值都比第二组高)
可是很奇怪耶 两组的BSA是来自同一次稀释的....
她问我为什麽会这样的时候，我也觉得很神奇
因为我觉得OD值不是应该和蛋白质浓度比较有关系吗??
或者纯粹巧合? (也太巧了...Otz)
其实拉哩拉杂打这麽多字...只是想请问
OD值和Dye的多寡有没有关系?
如果有它的原理是什麽呢??
谢谢大家看完我的问题 Otz
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.170.2.190
※ 编辑: linwei 来自: 218.170.2.190 (07/11 21:12)
1F：推 rangelovero:你的dye不是都加一样的量吗 那就没关系吧 07/12 15:13
2F：→ rangelovero:虽然有点看不太懂~但第一组OD普遍比第二组高 可能操作 07/12 15:13
3F：→ rangelovero:速度不够快 让两排反应时间差太多而造成 07/12 15:14
4F：推 linwei:嗯嗯 对後 没想到反应时间... 07/12 15:44
5F：推 linwei:那..Dye的多寡会影响吗?(即使只差5ul这麽微量..)如果会它原 07/12 15:46
6F：→ linwei:里是什麽呢?? 谢谢你的回答 <(_ _)> 07/12 15:47
※ 编辑: linwei 来自: 218.170.2.114 (07/12 15:49)
7F：推 rangelovero:我觉得应该不会吧 主要和蛋白质量有关系~但是若过量 07/12 17:37
8F：→ rangelovero:本身的红棕色是否会影响就不清楚了! 最简单的方法就是 07/12 17:39
9F：→ rangelovero:自己作测试= =" 其实买来的kit应该都会写要加多少dye 07/12 17:39
10F：→ rangelovero:一般人都会乖乖照protocol,如果真的好奇就test一下吧 07/12 17:41
11F：推 puh1005:光看你的文就觉得你对浓度跟量很没有sense... 07/12 18:41
12F：→ puh1005:Dye没有浓度(一般会稀释), 1000ul蛋白不是浓度 07/12 18:42
13F：推 linwei:呵 多谢楼上的指教 我错了^^" ꨠ 07/12 20:04
14F：推 linwei:然後我也清楚Dye买回来都会稀释..这样又让我多一问题了@@ 07/12 20:08
15F：推 linwei:不同浓度的Dye (就是稀释浓度不一样) 下去做两组对照後... 07/12 20:11
16F：→ linwei:这两组的吸光值会一样吗??(前提是两组的BSA都相同的浓度喔 07/12 20:12
17F：推 linwei:且加的Dye量也相同哟@@ ) 07/12 20:13
※ 编辑: linwei 来自: 140.128.68.249 (07/12 20:40)
18F：推 puh1005:当然不会一样罗~ 任何测定都有适合的范围,可以自己试试呀 07/12 22:19
19F：→ puh1005:前提是检量线的做法也要一样,且要用同一批稀释的dye 07/12 22:21
20F：→ puh1005:测定的时间也要相同,太久的话蛋白会开始变性沉淀 07/12 22:22
21F：→ puh1005:另外,不要太相信八爪,除非你对自己用pipetman很有自信 07/12 22:23
22F：推 linwei:感谢您的回答 :D 有机会希望可以自己试试..(怕有时实验室 07/12 23:39
23F：→ linwei:器材很贵不敢乱试 Otz..) 07/12 23:39