※ 引述《elderbear (曖昧不好不要曖昧)》之銘言： : 想請教一下 重複之間有差異(假設三重複的曲線不完全重疊) : 大家會把這樣的差異歸納在哪裡? (取樣問題? pipeting error?? PCR 效率???) : 還有什麼其他我忽略的可能嗎? 還是就是機差?? 我知道了,你的三重複跟我指的不一樣 不完全重疊我會歸咎於系統誤差 很可能是taq效率的問題 Mg加的量的問題,機器升降溫也會誤差 : : 簡單的定量就拿該gene稀釋10x,100x.1000x與Ct做檢量線 : : 條件抓的好通常還滿直的 : : 這樣就能比較出與control的倍數差異 : : housekeeping gene也做相同的事,務求precision提高 : : 如果同一批連housekeeping gene都差異很大就不用做了,從頭練技術 : : 題外話 : : 你看到結果沒差個5-6倍,最後還用統計硬凹的paper請懷疑他 : 我不太懂基因表現量的分析是怎麼分析的? 可能是醫學院的都愛管表現量吧,成見 : 不過我是在作基因改造含量的分析 : 對兩個目標片段拉兩個檢量線 : 然後把同個樣品的兩個基因的量相除得到基因改造含量的比 : 可是不是算出來多少就是多少嗎? : (舉例來講,放0.1%樣品可能做出0.08~0.12% 放0.5%樣品可能作出 0.46~0.56%) : 不太懂什麼叫做"結果沒差個5-6倍"這樣的結果? : 可是幫忙說明一下嗎?? 是呀.很像做transfection 這時應該問qPCR的偵測適不適合2倍內的結果 對於基因量的分析,你拉檢量線的方法是正確的 不過如果做三次就要捨去極值,的確不夠 如果照老闆的說法用平均的,應該很難看,也不見得信賴 反正花的不是自己的錢 就再重複吧 好的研究結果才是對老板最好的報酬 --

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