※ 引述《elderbear (暧昧不好不要暧昧)》之铭言： : 想请教一下 重复之间有差异(假设三重复的曲线不完全重叠) : 大家会把这样的差异归纳在哪里? (取样问题? pipeting error?? PCR 效率???) : 还有什麽其他我忽略的可能吗? 还是就是机差?? 我知道了,你的三重复跟我指的不一样 不完全重叠我会归咎於系统误差 很可能是taq效率的问题 Mg加的量的问题,机器升降温也会误差 : : 简单的定量就拿该gene稀释10x,100x.1000x与Ct做检量线 : : 条件抓的好通常还满直的 : : 这样就能比较出与control的倍数差异 : : housekeeping gene也做相同的事,务求precision提高 : : 如果同一批连housekeeping gene都差异很大就不用做了,从头练技术 : : 题外话 : : 你看到结果没差个5-6倍,最後还用统计硬凹的paper请怀疑他 : 我不太懂基因表现量的分析是怎麽分析的? 可能是医学院的都爱管表现量吧,成见 : 不过我是在作基因改造含量的分析 : 对两个目标片段拉两个检量线 : 然後把同个样品的两个基因的量相除得到基因改造含量的比 : 可是不是算出来多少就是多少吗? : (举例来讲,放0.1%样品可能做出0.08~0.12% 放0.5%样品可能作出 0.46~0.56%) : 不太懂什麽叫做"结果没差个5-6倍"这样的结果? : 可是帮忙说明一下吗?? 是呀.很像做transfection 这时应该问qPCR的侦测适不适合2倍内的结果 对於基因量的分析,你拉检量线的方法是正确的 不过如果做三次就要舍去极值,的确不够 如果照老板的说法用平均的,应该很难看,也不见得信赖 反正花的不是自己的钱 就再重复吧 好的研究结果才是对老板最好的报酬 --

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