作者ldy ()
看板Biotech
標題[求救] transfection 效率
時間Tue Jul 10 01:08:41 2007
請問要如何得知transfection的效率?
緣由
我以同樣的DNA量去transfect一組細胞
藥物處理後4小時收細胞
Run western後發現我transfect的protein量差好多(load相同的protein量)
差異是好幾倍
因為這是我很重要的control(理論上量要一樣)
目前估計應該是我的藥物處理改變了transfected protein的結構
以致於它在western時較易被辨認,而不是我藥物處理造成它表現量變化
可是理論上western時protein已經變性
藥物處理也不太可能影響我transfected vector 的 promotor(有的話也太衰了吧)
請各位板友幫我評估是何種原因?
我想說乾脆不看western
而在藥物處理完後收細胞看transfection效率
如果一樣就ok了
我的transfected protein帶有yfp
可是我不知道要怎樣測transfection效率
好像跑flow可以?
或是co-transfect一個internal control?
希望大家幫幫我
趕畢業急到快哭了
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.48.173
1F：→ stemcell:先確定你的protein真的是control 不會因為藥物處理而影響 07/10 11:11
2F：→ stemcell:表現量（影響結構有點遙遠的想法） 07/10 11:12
3F：→ stemcell:既然有帶YFP 你可以用YFP做western 或是上flow定量螢光 07/10 11:13
4F：→ ldy:我就是用yfp壓發現差好多2~3倍吧 07/10 14:04
5F：→ ldy:我就是預期給他的protein-yfp一樣 可是差好多喔 07/10 14:06
6F：→ ldy:可能真的要上flow了 謝謝 07/10 14:09
7F：推 stemcell:你們實驗是有沒有ACTIN或TUBULIN 作個CONTROL 07/10 15:23
8F：→ stemcell:也有可能是濃度有問題 或許 07/10 15:24