作者ldy ()
看板Biotech
标题[求救] transfection 效率
时间Tue Jul 10 01:08:41 2007
请问要如何得知transfection的效率?
缘由
我以同样的DNA量去transfect一组细胞
药物处理後4小时收细胞
Run western後发现我transfect的protein量差好多(load相同的protein量)
差异是好几倍
因为这是我很重要的control(理论上量要一样)
目前估计应该是我的药物处理改变了transfected protein的结构
以致於它在western时较易被辨认,而不是我药物处理造成它表现量变化
可是理论上western时protein已经变性
药物处理也不太可能影响我transfected vector 的 promotor(有的话也太衰了吧)
请各位板友帮我评估是何种原因?
我想说乾脆不看western
而在药物处理完後收细胞看transfection效率
如果一样就ok了
我的transfected protein带有yfp
可是我不知道要怎样测transfection效率
好像跑flow可以?
或是co-transfect一个internal control?
希望大家帮帮我
赶毕业急到快哭了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.48.173
1F：→ stemcell:先确定你的protein真的是control 不会因为药物处理而影响 07/10 11:11
2F：→ stemcell:表现量（影响结构有点遥远的想法） 07/10 11:12
3F：→ stemcell:既然有带YFP 你可以用YFP做western 或是上flow定量萤光 07/10 11:13
4F：→ ldy:我就是用yfp压发现差好多2~3倍吧 07/10 14:04
5F：→ ldy:我就是预期给他的protein-yfp一样 可是差好多喔 07/10 14:06
6F：→ ldy:可能真的要上flow了 谢谢 07/10 14:09
7F：推 stemcell:你们实验是有没有ACTIN或TUBULIN 作个CONTROL 07/10 15:23
8F：→ stemcell:也有可能是浓度有问题 或许 07/10 15:24