作者leftt (left)
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標題Re: [問題] 將mRNA轉成cDNA
時間Thu Jul 5 00:01:17 2007
1.抽RNA 買invitrogen的Trizol
2.轉cDNA 很多廠商都有出套組 照protocol來就好了
妳的狀況 應該要用random hexamer來合成cDNA
很多kit裡面都是附有兩種primer oligo dT跟 random hexamer
另外 SYBR就怕產物有雜訊 又怕primer dimer
請記得一定要做non template control
解離曲線也要看是不是single peak唷
※ 引述《belady (白衣天使黑心肝)》之銘言：
: 請問版上先進
: 作進實驗室要開始作real time RT-PCR
: 目前所欲想的儀器是使用Roche 方法是利用SyBr Green進行染色
: 不過對這方面完全沒有經驗 加上我是老師的第一位研究生
: 所以....
: 目前的構想是
: 像Roche購買SyBr Green套組加上sample cup
: 跟合作廠商訂製primer(follow先前已發表的paper)
: 萃細菌RNA-使用向廠商購買套組
: 但今天詢問Roche special list時 他有提到最好事先轉成cDNA在進行real time會比較好
: 但因為cDNA的資料實在是太少
: 以前教科書上也只說說將RNA以RTase處理便可以得到cDNA
: 但細節卻沒提到
: RTase也是購買套組嗎？
: 要在額外加入nucleotide嗎？
: 謝謝回答..
: 我剛去看了一些廠商的protocal
: 大約知道要使用的東西使哪些
: 不過protocal上的primer是使用oligo dT
: 不過原核細胞沒有polyA啊～
: 我該怎麼辦？
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◆ From: 61.64.154.117
1F：推 belady:謝謝你...回答的很詳細 可是invitrogen好貴... 07/05 09:56
2F：推 mikis1107:我們實驗室是用波斯特廠商出產的"RNA-Bee",我記得沒錯的 07/05 11:43
3F：→ mikis1107:的是三千吧@@...有點忘了可以問問看他們,用量還蠻省的 07/05 11:44