作者leftt (left)
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标题Re: [问题] 将mRNA转成cDNA
时间Thu Jul 5 00:01:17 2007
1.抽RNA 买invitrogen的Trizol
2.转cDNA 很多厂商都有出套组 照protocol来就好了
你的状况 应该要用random hexamer来合成cDNA
很多kit里面都是附有两种primer oligo dT跟 random hexamer
另外 SYBR就怕产物有杂讯 又怕primer dimer
请记得一定要做non template control
解离曲线也要看是不是single peak唷
※ 引述《belady (白衣天使黑心肝)》之铭言：
: 请问版上先进
: 作进实验室要开始作real time RT-PCR
: 目前所欲想的仪器是使用Roche 方法是利用SyBr Green进行染色
: 不过对这方面完全没有经验 加上我是老师的第一位研究生
: 所以....
: 目前的构想是
: 像Roche购买SyBr Green套组加上sample cup
: 跟合作厂商订制primer(follow先前已发表的paper)
: 萃细菌RNA-使用向厂商购买套组
: 但今天询问Roche special list时 他有提到最好事先转成cDNA在进行real time会比较好
: 但因为cDNA的资料实在是太少
: 以前教科书上也只说说将RNA以RTase处理便可以得到cDNA
: 但细节却没提到
: RTase也是购买套组吗？
: 要在额外加入nucleotide吗？
: 谢谢回答..
: 我刚去看了一些厂商的protocal
: 大约知道要使用的东西使哪些
: 不过protocal上的primer是使用oligo dT
: 不过原核细胞没有polyA啊～
: 我该怎麽办？
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◆ From: 61.64.154.117
1F：推 belady:谢谢你...回答的很详细 可是invitrogen好贵... 07/05 09:56
2F：推 mikis1107:我们实验室是用波斯特厂商出产的"RNA-Bee",我记得没错的 07/05 11:43
3F：→ mikis1107:的是三千吧@@...有点忘了可以问问看他们,用量还蛮省的 07/05 11:44