作者belady (白衣天使黑心肝)
看板Biotech
標題[問題] 將mRNA轉成cDNA
時間Wed Jul 4 16:05:27 2007
請問版上先進
作進實驗室要開始作real time RT-PCR
目前所欲想的儀器是使用Roche 方法是利用SyBr Green進行染色
不過對這方面完全沒有經驗 加上我是老師的第一位研究生
所以....
目前的構想是
像Roche購買SyBr Green套組加上sample cup
跟合作廠商訂製primer(follow先前已發表的paper)
萃細菌RNA-使用向廠商購買套組
但今天詢問Roche special list時 他有提到最好事先轉成cDNA在進行real time會比較好
但因為cDNA的資料實在是太少
以前教科書上也只說說將RNA以RTase處理便可以得到cDNA
但細節卻沒提到
RTase也是購買套組嗎？
要在額外加入nucleotide嗎？
謝謝回答..
我剛去看了一些廠商的protocal
大約知道要使用的東西使哪些
不過protocal上的primer是使用oligo dT
不過原核細胞沒有polyA啊～
我該怎麼辦？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.151.223
1F：推 LBP:是SYBR green.... (小聲) 07/04 16:23
2F：推 LBP:做RT有kit可以買,通常所需要的東西kit裡面都有 :) 07/04 16:26
3F：推 mikis1107:可以上網找英文protocol先看看要準備的東西有哪些 07/04 16:37
※ 編輯: belady 來自: 140.128.151.223 (07/04 16:44)
4F：推 belady:謝謝一樓～我改好咧！ 07/04 16:44
※ 編輯: belady 來自: 140.128.151.223 (07/04 16:46)
5F：推 micocat:random hexmer? 07/04 19:08
6F：推 belady:謝謝版大先進們的幫忙～明天一早我會再跟老闆討論最後決定 07/05 01:08