作者kyokolove (心想事成)
看板Biotech
標題[問題] real-time PCR
時間Thu Jun 7 09:25:32 2007
最近要新學的 可是上機幾次都有問題
我是用SYBR green的MIX 而我的template約40ng primer設計在200bp內
以下是我上機時的幾個問題
1. 有些sample會undetect 是什麼原因呢???
而且我有做水的negative control 確定primerOK
2. 請問sample上機後要用機器去標定他 要怎麼寫呢
機器怎麼知道我的二重複在哪裡???
這樣講有點不清楚 我圖示一下
我是同一種基因(geneX) 兩個不同細胞cDNA(A、B)做比較
以下是我的操作方法
我就load一排 A A B B 然後將四個well框起來 按well inspector
選擇detector是誰 我就直接按自己gene名稱那個
就結束了...
這樣機器是不是不知道二重複在哪裡阿
我是不是要在每格多加上A、B的名稱做區分阿???
3. 可以請各位前輩多給我一點有關做real-time PCR應該注意的事項嗎???
感覺實驗做不出來常常是小細節的問題...
我真的很迷惘阿@__@ 感謝大家的解答~~~~~~~~~~~~~
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◆ From: 163.25.118.149
1F：推 freesoul:你機器是哪一台? 另外資料分析我都是自己用Excel作 06/07 11:09
2F：推 kyokolove:機器是ABI 7000 06/07 11:10
3F：→ aggaci:Detector不是可以標示二重複嗎？ 06/07 12:34
4F：推 elderbear:ABI7500...sample setup 名稱一樣的well直接為重複 06/07 18:02