作者kyokolove (心想事成)
看板Biotech
标题[问题] real-time PCR
时间Thu Jun 7 09:25:32 2007
最近要新学的 可是上机几次都有问题
我是用SYBR green的MIX 而我的template约40ng primer设计在200bp内
以下是我上机时的几个问题
1. 有些sample会undetect 是什麽原因呢???
而且我有做水的negative control 确定primerOK
2. 请问sample上机後要用机器去标定他 要怎麽写呢
机器怎麽知道我的二重复在哪里???
这样讲有点不清楚 我图示一下
我是同一种基因(geneX) 两个不同细胞cDNA(A、B)做比较
以下是我的操作方法
我就load一排 A A B B 然後将四个well框起来 按well inspector
选择detector是谁 我就直接按自己gene名称那个
就结束了...
这样机器是不是不知道二重复在哪里阿
我是不是要在每格多加上A、B的名称做区分阿???
3. 可以请各位前辈多给我一点有关做real-time PCR应该注意的事项吗???
感觉实验做不出来常常是小细节的问题...
我真的很迷惘阿@__@ 感谢大家的解答~~~~~~~~~~~~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.149
1F：推 freesoul:你机器是哪一台? 另外资料分析我都是自己用Excel作 06/07 11:09
2F：推 kyokolove:机器是ABI 7000 06/07 11:10
3F：→ aggaci:Detector不是可以标示二重复吗？ 06/07 12:34
4F：推 elderbear:ABI7500...sample setup 名称一样的well直接为重复 06/07 18:02