作者legendhero (ming)
看板Biotech
標題Re: [問題]DNA 定序問題
時間Fri Jun 1 14:17:20 2007
※ 引述《legendhero (ming)》之銘言：
: 最近老師叫我拿insert gene 的plasmid去定序
: 看gene有沒有mutation
: 但都只定到一小部份,大部份都是N,而且後半段訊號會不見
: plasmid跑gel 出來的size是對的
: PCR完後做純化,用酒精沉澱,最後在室溫下倒著晾乾PCR產物殘留的酒精,
: 要等2天左右才能上機
: 是不是等的時間過長導致訊號不見,還是PCR出問題
: 我有一次在P完後,做純化,立刻上機,就做得出來
: 但因為一些因素,非得等2天才能上機
: 有那位大大能幫我解決這個問題>.<
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◆ From: 163.22.18.90
推 Portland:避光? 06/01 08:38
推 xenopus:insert size多大?你用幾個primer去定序?
我現在只敢用1條primer去跑呢,insert約2.5kb,plasmid全長約8.2kb,
PCR
25 cycle 96度 3min-> 96度 30sec-> 55度 15sec-> 60度 4min-> 4度
但定出來結果都一樣,我都有避光呢
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◆ From: 163.22.18.90
1F：推 Liebesleid:聽起來像是plasmid掛點了 有時候濃度不對也會這樣 06/02 19:28
2F：推 jwencmc:抽出來的plasmid有沒有測260/280呢??純度?? 06/03 01:03
3F：推 fosca:定序只能用一個Primer定序喔。你可以分別用5端，3端的Primer 06/04 13:38
4F：推 fosca:送定序，在交叉比對。 06/04 13:43