作者legendhero (ming)
看板Biotech
标题Re: [问题]DNA 定序问题
时间Fri Jun 1 14:17:20 2007
※ 引述《legendhero (ming)》之铭言：
: 最近老师叫我拿insert gene 的plasmid去定序
: 看gene有没有mutation
: 但都只定到一小部份,大部份都是N,而且後半段讯号会不见
: plasmid跑gel 出来的size是对的
: PCR完後做纯化,用酒精沉淀,最後在室温下倒着晾乾PCR产物残留的酒精,
: 要等2天左右才能上机
: 是不是等的时间过长导致讯号不见,还是PCR出问题
: 我有一次在P完後,做纯化,立刻上机,就做得出来
: 但因为一些因素,非得等2天才能上机
: 有那位大大能帮我解决这个问题>.<
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.22.18.90
推 Portland:避光? 06/01 08:38
推 xenopus:insert size多大?你用几个primer去定序?
我现在只敢用1条primer去跑呢,insert约2.5kb,plasmid全长约8.2kb,
PCR
25 cycle 96度 3min-> 96度 30sec-> 55度 15sec-> 60度 4min-> 4度
但定出来结果都一样,我都有避光呢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.22.18.90
1F：推 Liebesleid:听起来像是plasmid挂点了 有时候浓度不对也会这样 06/02 19:28
2F：推 jwencmc:抽出来的plasmid有没有测260/280呢??纯度?? 06/03 01:03
3F：推 fosca:定序只能用一个Primer定序喔。你可以分别用5端，3端的Primer 06/04 13:38
4F：推 fosca:送定序，在交叉比对。 06/04 13:43