請教諸位高手 我想要讓腫瘤細胞表現特定蛋白質 選用的系統是invitorgen的GFP Fusion TOPO vector 可以用geneticin做selection transfection reagent選用Fugene 做完transfection後兩天 觀察到有部分細胞有明顯發亮 但是比例不高 而其他細胞是完全不會亮 以kit所附的GFP plasmid做的control 會亮的細胞比例也是差不多 於是換了含有geneticin的medium培養 預備將有transfect成功的細胞篩選出來 很多細胞就脫落死亡 換過兩三次medium後subculture control組的(fugene only)的細胞是完全死光了 理論上來說剩下的細胞可以抵抗geneticin 應該是可以表現GFP 可是我去看螢光 本來期待可以看到繁星點點 可是卻發現很亮的細胞變少了 但是視野下充滿了微微發亮的細胞 科學一點的講法 很亮的細胞曝光1/4秒即可抓到影像 微亮的細胞曝光時間拉到一分鐘也不是很清楚 但是從目鏡可以肉眼觀測到 不知道諸位有經驗的達人 這樣算是有篩選成功嗎 還是要整盒細胞都會非常的亮呢 微亮的細胞是背景嗎 可是先前(fugene only, no plasmid)組的細胞是一點亮度也沒有的 感覺十分迷惑 我已經收下一部分的細胞預備以western測試我的表現蛋白 但是還是想先請教一下有經驗的達人 這種狀況是發生了什麼事呢 感激不盡!! --

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