请教诸位高手 我想要让肿瘤细胞表现特定蛋白质 选用的系统是invitorgen的GFP Fusion TOPO vector 可以用geneticin做selection transfection reagent选用Fugene 做完transfection後两天 观察到有部分细胞有明显发亮 但是比例不高 而其他细胞是完全不会亮 以kit所附的GFP plasmid做的control 会亮的细胞比例也是差不多 於是换了含有geneticin的medium培养 预备将有transfect成功的细胞筛选出来 很多细胞就脱落死亡 换过两三次medium後subculture control组的(fugene only)的细胞是完全死光了 理论上来说剩下的细胞可以抵抗geneticin 应该是可以表现GFP 可是我去看萤光 本来期待可以看到繁星点点 可是却发现很亮的细胞变少了 但是视野下充满了微微发亮的细胞 科学一点的讲法 很亮的细胞曝光1/4秒即可抓到影像 微亮的细胞曝光时间拉到一分钟也不是很清楚 但是从目镜可以肉眼观测到 不知道诸位有经验的达人 这样算是有筛选成功吗 还是要整盒细胞都会非常的亮呢 微亮的细胞是背景吗 可是先前(fugene only, no plasmid)组的细胞是一点亮度也没有的 感觉十分迷惑 我已经收下一部分的细胞预备以western测试我的表现蛋白 但是还是想先请教一下有经验的达人 这种状况是发生了什麽事呢 感激不尽!! --

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