我想問的問題跟上一篇ER的問題有點像 這是我之前問大家ER stress的問題 後來我使用測GRP78（bip)的方式 加我的刺激劑 測時間點 一開始我直接用lysis buffer下去收細胞 離心之後取cytosolic fraction 前兩次看起來好像有反應 但是後面又做了幾次都做不出來 之後我參考一些paper 大家好像都收whole cell lysate 我第一次用PBS把細胞刮下來 sonication之後直接跑 結果看不太到GRP78的表現 我們老師就叫我改用lysis buffer收 sonication之後直接跑 結果跑出來非常一致 看不出時間變化 =.= 我想請問我應該要怎麼收才對 因為細胞受到stess之後 GRP78應該是由ER的膜上跑出來才對吧？ 我的想法是 先把細胞脹破 保持胞器的完整性 離心把細胞膜和胞器離下來 收集cytosol fraction 再用強一點的lysis buffer加下去 然後sonication把ER上的protein通通lysis出來 最後比較cytosal和最後膜上的GRP78表現 如果ER受到stress cytosal的GRP78應該會增加 而ER膜上的量會減少 （（ 不知道會不會寫得太複雜=.= ）） 如果是這樣收的話對嗎？ 謝謝大家喔^^ p.s 上次有回應到我信箱的那位大大 可以請你再回一次給我嗎 因為我不小心把信通通刪了 所以問不到你啦 >"< 感恩^^ ※ 引述《liuse (充實自己，提昇自己)》之銘言： : ※ 引述《aljkpyy (hihi)》之銘言： : : 印象中好像可藉由測某些ER stress時才會產生的分子 : : 也就是偵測跟ER stress有關的marker : : 不過名稱我忘了~ 你可以查一下~ : 有幾個 : 一個是eIF2alpha的phosphorylation level : 一個是PERK的phosphorylation level : 一個是染Bip --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.71.94.31 ※ 編輯: wuwawei 來自: 203.71.94.31 (05/23 19:05)