我想问的问题跟上一篇ER的问题有点像 这是我之前问大家ER stress的问题 後来我使用测GRP78（bip)的方式 加我的刺激剂 测时间点 一开始我直接用lysis buffer下去收细胞 离心之後取cytosolic fraction 前两次看起来好像有反应 但是後面又做了几次都做不出来 之後我参考一些paper 大家好像都收whole cell lysate 我第一次用PBS把细胞刮下来 sonication之後直接跑 结果看不太到GRP78的表现 我们老师就叫我改用lysis buffer收 sonication之後直接跑 结果跑出来非常一致 看不出时间变化 =.= 我想请问我应该要怎麽收才对 因为细胞受到stess之後 GRP78应该是由ER的膜上跑出来才对吧？ 我的想法是 先把细胞胀破 保持胞器的完整性 离心把细胞膜和胞器离下来 收集cytosol fraction 再用强一点的lysis buffer加下去 然後sonication把ER上的protein通通lysis出来 最後比较cytosal和最後膜上的GRP78表现 如果ER受到stress cytosal的GRP78应该会增加 而ER膜上的量会减少 （（ 不知道会不会写得太复杂=.= ）） 如果是这样收的话对吗？ 谢谢大家喔^^ p.s 上次有回应到我信箱的那位大大 可以请你再回一次给我吗 因为我不小心把信通通删了 所以问不到你啦 >"< 感恩^^ ※ 引述《liuse (充实自己，提昇自己)》之铭言： : ※ 引述《aljkpyy (hihi)》之铭言： : : 印象中好像可藉由测某些ER stress时才会产生的分子 : : 也就是侦测跟ER stress有关的marker : : 不过名称我忘了~ 你可以查一下~ : 有几个 : 一个是eIF2alpha的phosphorylation level : 一个是PERK的phosphorylation level : 一个是染Bip --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 203.71.94.31 ※ 编辑: wuwawei 来自: 203.71.94.31 (05/23 19:05)