作者ddNTP (冏)
看板Biotech
標題[問題] 有關ER上面的membrane protein
時間Wed May 23 16:44:27 2007
我目前手上有一個基因 [構築在pEF6/V5]
是在ER上面類似translocon的protein
建立stable clone後，卻沒辦法利用 V5 antibody辨識到
1.我確定它的確有in-frame
2.加bla篩了兩個多月了，挑了72個clone，一個都沒有 冏
後來想到，會不會是membrane protein的關係
我們是whole cell直接加入RIPA,4度作用30分
看paper，其他人是sonication後，高速離心分出membrane protein
[但這可能是purify用的]
總而言之，有沒有哪位可以跟我說一下可能出現的問題
另外，有沒有做ER方面的人可以討論一下
大感激!!!!!!!
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◆ From: 140.120.213.177
1F：推 b46006:transfection後兩天就可用WB確認了 有的話再挑clones 05/23 19:11
2F：推 ddNTP:其實我有用transient確認過 05/23 19:31
3F：→ ddNTP:第一次有被V5辨識到，才挑stable clone 05/23 19:32
4F：→ ddNTP:後來挑了stable clone後，就沒辦法被V5給認到了 [哭] 05/23 19:32
5F：→ ddNTP:後來在進行一次transient的實驗，那條band就離我而去了 05/23 19:33
6F：推 b46006:CMV promoter容易被inactivated 不過問題好像是根本沒表現 05/23 19:59