作者ddNTP (冏)
看板Biotech
标题[问题] 有关ER上面的membrane protein
时间Wed May 23 16:44:27 2007
我目前手上有一个基因 [构筑在pEF6/V5]
是在ER上面类似translocon的protein
建立stable clone後，却没办法利用 V5 antibody辨识到
1.我确定它的确有in-frame
2.加bla筛了两个多月了，挑了72个clone，一个都没有 冏
後来想到，会不会是membrane protein的关系
我们是whole cell直接加入RIPA,4度作用30分
看paper，其他人是sonication後，高速离心分出membrane protein
[但这可能是purify用的]
总而言之，有没有哪位可以跟我说一下可能出现的问题
另外，有没有做ER方面的人可以讨论一下
大感激!!!!!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.213.177
1F：推 b46006:transfection後两天就可用WB确认了 有的话再挑clones 05/23 19:11
2F：推 ddNTP:其实我有用transient确认过 05/23 19:31
3F：→ ddNTP:第一次有被V5辨识到，才挑stable clone 05/23 19:32
4F：→ ddNTP:後来挑了stable clone後，就没办法被V5给认到了 [哭] 05/23 19:32
5F：→ ddNTP:後来在进行一次transient的实验，那条band就离我而去了 05/23 19:33
6F：推 b46006:CMV promoter容易被inactivated 不过问题好像是根本没表现 05/23 19:59