: : 來改其他的條件。有雜band沒關係，天知道我多想看一看雜band來改進啊。 : 一般應該是看primer的Tm值決定吧 : 通常使用Tm-5度 : 取兩個primer中Tm比較低的那個來計算 : 如果做不出來就再減5度 哇，如果做不出來，tm低的減到10度都會變成四十多度了耶，真的可以嗎？可以的話我要 衝了。 : 有沒有考慮過其他的問題? : ex.primer dimer 我的確一直有這個問題，是因為加過量嗎？加過量會造成做不出來嗎？如果是說引子會互 黏，真的會嗎？因為我都是參考paper來訂的耶。 serotonin transporter的primer 5-GGC GTT GCC GCT CTG AAT GC-3 and 5-GAG GGA CTG AGC TGG ACA ACC A-3). 產物大小預計五百多bp gc content：61.9% tm1個是59.7度， 另一個 gc content 65% tm是62.3度 drd3 5 - GCT CTA TCTCCA ACT CTC ACA-3 , reverse primer: 5 -AAG TCT ACT CAC CTC CAG GTA-3 產物大小462bp gc content47.6% tm53.5 另一個gc content47.6% tn54.2 tph forward primer, 5- TTCAGATCCCTTCTTCTATACCCCAGA-3; reverse primer, 5-GGACATGACCTAAGAGTTCATGGCA-3. 產物大小918bp gc content48% tn58.6 另一個 gc content 44.4% tm58.6 : 另外請問一下你的產物大小預計是多少? : 妳的template是什麼?(plasmid? genome?) template是口腔綿棒粹取出來的，應該是genome吧。 : 還有妳寫DNA沒定量 : 有時候DNA的量、copy數都會影響PCR成功與否 我的DNA都是別人測試過夾得出東西的， 我自己也有夾出一個基因，這樣還會是DNA濃度的問題嗎？ : 最好還是定一下量比較好 : 你說paper寫annealing溫度55 : 意思是說你的primer是和那篇paper使用的primer一樣嗎? : 那麼我覺得annealing溫度應該不是問題 : 照他的55度應該做的出來 我的條件全都按照paper來做的。只是我這兩週都直接降到50度，因為我先前都是按照 paper的溫度有做成功一、兩次（做幾十次吧，而且超弱），後來再也做不出來，現在 乾脆全降到五十度，想說先做出雜band再來升溫度，結果還是做不出來。 : 你的問題可能在template的取得、酵素的好壞(有時候酵素會壞掉) : 會是其他問題 dna是近一個月學弟剛萃完而且夾他的基因超亮的，我也有分裝，這幾天把buffer、taq dntp都換掉，還是沒有。 : 也有可能你的template中根本沒有那個基因?? 應該不可能，這些基因每個人都有，這些基因是人類很有名的基因，跟犯罪有關的基因。 --

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