: : 来改其他的条件。有杂band没关系，天知道我多想看一看杂band来改进啊。 : 一般应该是看primer的Tm值决定吧 : 通常使用Tm-5度 : 取两个primer中Tm比较低的那个来计算 : 如果做不出来就再减5度 哇，如果做不出来，tm低的减到10度都会变成四十多度了耶，真的可以吗？可以的话我要 冲了。 : 有没有考虑过其他的问题? : ex.primer dimer 我的确一直有这个问题，是因为加过量吗？加过量会造成做不出来吗？如果是说引子会互 黏，真的会吗？因为我都是参考paper来订的耶。 serotonin transporter的primer 5-GGC GTT GCC GCT CTG AAT GC-3 and 5-GAG GGA CTG AGC TGG ACA ACC A-3). 产物大小预计五百多bp gc content：61.9% tm1个是59.7度， 另一个 gc content 65% tm是62.3度 drd3 5 - GCT CTA TCTCCA ACT CTC ACA-3 , reverse primer: 5 -AAG TCT ACT CAC CTC CAG GTA-3 产物大小462bp gc content47.6% tm53.5 另一个gc content47.6% tn54.2 tph forward primer, 5- TTCAGATCCCTTCTTCTATACCCCAGA-3; reverse primer, 5-GGACATGACCTAAGAGTTCATGGCA-3. 产物大小918bp gc content48% tn58.6 另一个 gc content 44.4% tm58.6 : 另外请问一下你的产物大小预计是多少? : 你的template是什麽?(plasmid? genome?) template是口腔绵棒粹取出来的，应该是genome吧。 : 还有你写DNA没定量 : 有时候DNA的量、copy数都会影响PCR成功与否 我的DNA都是别人测试过夹得出东西的， 我自己也有夹出一个基因，这样还会是DNA浓度的问题吗？ : 最好还是定一下量比较好 : 你说paper写annealing温度55 : 意思是说你的primer是和那篇paper使用的primer一样吗? : 那麽我觉得annealing温度应该不是问题 : 照他的55度应该做的出来 我的条件全都按照paper来做的。只是我这两周都直接降到50度，因为我先前都是按照 paper的温度有做成功一、两次（做几十次吧，而且超弱），後来再也做不出来，现在 乾脆全降到五十度，想说先做出杂band再来升温度，结果还是做不出来。 : 你的问题可能在template的取得、酵素的好坏(有时候酵素会坏掉) : 会是其他问题 dna是近一个月学弟刚萃完而且夹他的基因超亮的，我也有分装，这几天把buffer、taq dntp都换掉，还是没有。 : 也有可能你的template中根本没有那个基因?? 应该不可能，这些基因每个人都有，这些基因是人类很有名的基因，跟犯罪有关的基因。 --

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