作者polestar (...)
看板Biotech
標題想請教各位大大蛋白質表現的問題^^
時間Tue May 22 16:51:29 2007
各位大大請問一下 我的蛋白質大小約85kD 在N端還帶有一小段的signal peptide
但是它是胞內的蛋白質
目前已經試過不同溫度(37~25度) 不同IPTG濃度(0.01mM~1mM)來表現
也利用在蛋白質N端加上不同的fusion protein(GST,Trx,NusA)希望增加溶解度
並且同時用了E.coli BL21(DE3)和 JM109(DE3)來做為表現的host
但是表現出來的蛋白質幾乎都是inclusion body
不知道還有沒有辦法去改善這個問題呢 希望能拿到soluble form的蛋白質
利用inclusion body來做refolding是最後的打算了> <
謝謝^^
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◆ From: 140.112.78.30
1F：→ polestar:更正 溫度試過(37~15度) 05/22 16:53
2F：推 liuse:我覺得太大了耶... 85KDa 還加fusion 05/22 17:59
3F：推 chiehgriffin:您的蛋白質有很多雙硫鍵嗎. 如果有可以換不同的菌 05/22 21:08
4F：推 b46006:細菌的蛋白質也有雙硫鍵嗎? 05/23 19:06