最近在做construct 可是在一開始PCR放大部分遇到很有趣的問題 前提是vector已經訂過序 確定是對的 且抽取plasmid方法是大量(步驟繁複 較純) 我要的片段大小為1K左右 由於某些原因我做了以下測試 1.利用設計的primer做PCR 夾出的片段大約為0.8K =>大小不對 2.用vector上的primer做PCR 夾出的片段大約為0.4K =>應該要1.3K左右 大小不對 3.以vector上的forward以及設計的reverse做PCR 夾出的片段大約為1K =>應該比1K多一點 大小不對 4.以vector上的reversa以及設計的forward做PCR 夾出的片段大約為1K =>應該比1K多一點 大小不對 可是最後我用CDNA與設計的primer去做 就有片段 大小吻合 老師的意見是有可能細菌的genome有相似的片段 我想問的是 大家在做PCR有遇過這種問題嗎 另外如果我想要搜尋E.coli中的genome與primer配對的可能 用NCBI的BLAST功能怎麼搜尋比較好 還是有其他軟體可以幫忙 謝謝 --

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