最近在做construct 可是在一开始PCR放大部分遇到很有趣的问题 前提是vector已经订过序 确定是对的 且抽取plasmid方法是大量(步骤繁复 较纯) 我要的片段大小为1K左右 由於某些原因我做了以下测试 1.利用设计的primer做PCR 夹出的片段大约为0.8K =>大小不对 2.用vector上的primer做PCR 夹出的片段大约为0.4K =>应该要1.3K左右 大小不对 3.以vector上的forward以及设计的reverse做PCR 夹出的片段大约为1K =>应该比1K多一点 大小不对 4.以vector上的reversa以及设计的forward做PCR 夹出的片段大约为1K =>应该比1K多一点 大小不对 可是最後我用CDNA与设计的primer去做 就有片段 大小吻合 老师的意见是有可能细菌的genome有相似的片段 我想问的是 大家在做PCR有遇过这种问题吗 另外如果我想要搜寻E.coli中的genome与primer配对的可能 用NCBI的BLAST功能怎麽搜寻比较好 还是有其他软体可以帮忙 谢谢 --

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