請問一下您的蛋白質分子量是多少? 基本上大於100 kDa的protein在E. coli內的表現就會比較不好 另外真核membrane protein可能會有一些修飾作用, 在E. coli內無法進行而有毒性 Membrane protein也很容易形成inclusion body 如果先不考慮技術層面的因素 我個人的建議是 1. 選用E. coli C41 可耐受較強的蛋白質毒性 2. 換用yeast expression system, 尤其是大分子量的真核細胞膜蛋白 3. 選用分子量較大的tagged-fusion protein system (like INTEIN) 因為分子量夠大, 可以破壞蛋白質的構形, 容易避免毒性和inclusion body ※ 引述《content71 (羅莉飼養中...)》之銘言： : 先對原PO說聲不好意思，借用你的標題 : 因為我也遇到induction的問題急著想找人幫忙 : 我的狀況是 : vector : 真核human membrane protein接入pET28a (His-tag) : E. coli strain : BL21(DE3) : BL21(DE3)pLysS : Rosetta(DE3) : induction : E. coli OD600 ~0.4 : 0.5mM, 1mM, for 37度C, 3hr : result --> BL21(DE3) 在induction後就不太生長，SDS-PAGE check無表現 : BL21(DE3)pLysS 在induction後會繼續長，但SDS-PAGE check無表現 : western check在uninduce及induce都有表現但很少,leakage? : Rosetta(DE3) transformation後就沒出現colonies了 (試過兩次) : 我自己的推測是 : 此protein對E.coli有強毒性，所以一但induction菌就會掛掉或不生長 : 現在想到的是 1. 降溫induction延長時間 : 2. 換Rosetta(DE3)pLysS (但我們老師肯定不會買...太了解他orz) : 3. 換表現菌種 : 4. 大量培養，硬是純化 (最後的辦法，算過大概需3 miligram) : 怎麼辦阿....我快哭出來了 --

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