作者dnab (問個問題)
看板Biotech
標題[問題] pcr及電泳的問題.......
時間Fri May 11 15:50:21 2007
一、我做的基因是人類的drd2、TPH、5-HT2C、ADRA2A、serotonin transporter等基因，
想請問一下各位高手，有沒有那個資料庫能查詢這些基因的電泳圖的呢？除了找paper這個
方法之外，有無這種電泳資料庫及基因頻率資料庫呢？對了，我做的基因都是人家做過的
。
二、PCR完再跑電泳的結果老是很弱，甚至比primer dimer還弱，請問我能怎麼改進呢？降
低annealing溫度（可是已經降到50度了耶）、換dna（因為dna老舊嗎？）、稀釋dna？或
是減少DNTP的量（因為會搶鎂離子嗎？）？這些我都還沒試過，還有其他方法嗎，這些方
法的測試優先次序為何？補充說明我的DNA是口腔棉棒萃取出來的。
三、老師跟我說pcr產物要很亮很強才能做RFLP，請問這是真的嗎？是不是切出來之片段
還會更弱所以看不到呢？還是說產物不夠亮有變通方法呢？
四、爬文發現有些試劑重複凍、融會嚴重影響實驗結果，所以應分裝，所以DNA要分裝，那
dntp、buffer也會有這麼嚴重的影響嗎？還是說上述兩者較不易壞？
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※ 編輯: dnab 來自: 203.71.2.194 (05/11 16:11)
1F：推 SUESHIN:是提高annealing溫度... 05/11 20:20
2F：推 abelee:降primer的量,加DMSO,或產物純化後稀釋再跑一次PCR 05/11 23:00
3F：推 rmp:你的primer是不是自己黏得很厲害 05/31 12:24
4F：推 rmp:檢體重複冷凍解凍會壞掉，試劑也一樣，最好都分裝 05/31 12:27
5F：推 rmp:buffer不用冰 你可以跑一片膠確認DNA的 quality 05/31 12:32
6F：→ rmp:做RFLP時 你load gel時可以load多一點 05/31 12:34