作者dnab (问个问题)
看板Biotech
标题[问题] pcr及电泳的问题.......
时间Fri May 11 15:50:21 2007
一、我做的基因是人类的drd2、TPH、5-HT2C、ADRA2A、serotonin transporter等基因，
想请问一下各位高手，有没有那个资料库能查询这些基因的电泳图的呢？除了找paper这个
方法之外，有无这种电泳资料库及基因频率资料库呢？对了，我做的基因都是人家做过的
。
二、PCR完再跑电泳的结果老是很弱，甚至比primer dimer还弱，请问我能怎麽改进呢？降
低annealing温度（可是已经降到50度了耶）、换dna（因为dna老旧吗？）、稀释dna？或
是减少DNTP的量（因为会抢镁离子吗？）？这些我都还没试过，还有其他方法吗，这些方
法的测试优先次序为何？补充说明我的DNA是口腔棉棒萃取出来的。
三、老师跟我说pcr产物要很亮很强才能做RFLP，请问这是真的吗？是不是切出来之片段
还会更弱所以看不到呢？还是说产物不够亮有变通方法呢？
四、爬文发现有些试剂重复冻、融会严重影响实验结果，所以应分装，所以DNA要分装，那
dntp、buffer也会有这麽严重的影响吗？还是说上述两者较不易坏？
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※ 编辑: dnab 来自: 203.71.2.194 (05/11 16:11)
1F：推 SUESHIN:是提高annealing温度... 05/11 20:20
2F：推 abelee:降primer的量,加DMSO,或产物纯化後稀释再跑一次PCR 05/11 23:00
3F：推 rmp:你的primer是不是自己黏得很厉害 05/31 12:24
4F：推 rmp:检体重复冷冻解冻会坏掉，试剂也一样，最好都分装 05/31 12:27
5F：推 rmp:buffer不用冰 你可以跑一片胶确认DNA的 quality 05/31 12:32
6F：→ rmp:做RFLP时 你load gel时可以load多一点 05/31 12:34