之前用taq等試劑來做都做得出來，但最近改用老師給我的genemark pcr master mix kit 後，就都做不出來了，截錄其中說明如下，the pcr master mix is supplied as a 5x concentrated ready to use mix,that is a mixture of recombinant 1.25u of taq dna polymerse,reaction fuffer,mgcl2（final concentration 1.75mM）,200uM dntp and enzyme stablizer...............以下略。 我看它的成份是針對50ul的pcr來說的，而50ul的建議mix量是10ul，我是做25ul，所以 只需要5ul，taq量看起來算是1.25u吧。 我之前的做法都是pcr反應體積25ul，taq是加0.5ul（濃度是5U/ul），所以看起來taq 之量是0.5ux5=2.5u吧，也就是濃度是兩倍。 我在想，是不是應該要把mixuture加入比例變成2倍？但我同學說這樣buffer及Mg濃度 都會變，這樣反而使taq無法反應。 請問一下，我的taq量是不是不足，以致實驗做不出來？因為是mixture，我無法更改濃度 是嗎？ 以上問題麻煩各位高手了，謝謝。 --

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