之前用taq等试剂来做都做得出来，但最近改用老师给我的genemark pcr master mix kit 後，就都做不出来了，截录其中说明如下，the pcr master mix is supplied as a 5x concentrated ready to use mix,that is a mixture of recombinant 1.25u of taq dna polymerse,reaction fuffer,mgcl2（final concentration 1.75mM）,200uM dntp and enzyme stablizer...............以下略。 我看它的成份是针对50ul的pcr来说的，而50ul的建议mix量是10ul，我是做25ul，所以 只需要5ul，taq量看起来算是1.25u吧。 我之前的做法都是pcr反应体积25ul，taq是加0.5ul（浓度是5U/ul），所以看起来taq 之量是0.5ux5=2.5u吧，也就是浓度是两倍。 我在想，是不是应该要把mixuture加入比例变成2倍？但我同学说这样buffer及Mg浓度 都会变，这样反而使taq无法反应。 请问一下，我的taq量是不是不足，以致实验做不出来？因为是mixture，我无法更改浓度 是吗？ 以上问题麻烦各位高手了，谢谢。 --

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