作者dropdred (keep the faith)
看板Biotech
標題[問題] PCR夾GC rich region
時間Tue Apr 17 18:29:39 2007
最近在夾GC rich的位置,約80%
amplicon約650bp
primer是用primer3設計的,Tm=60度
試過AmpliTaq, 在60度跟touchdown會夾出約300bp的片段
但在升溫上去68度就什麼都沒有了...連殘存的primer都看不見
另外,還試了AmpliTaq Gold
更慘,不論是60, 65, 68度
什麼都沒有...整塊膠只有marker
想請問大家的經驗....感激不盡!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.228.195.21
1F：推 aggaci:加betaine 1M，我加了就P出來了！！親身經歷 04/17 18:51
2F：推 silverberry:加 1% DMSO 也 p出來過~~P 2.5 K 的!! 04/17 18:52
3F：推 dropdred:請問上述所說的是最終濃度嗎 04/17 19:43
4F：→ aggaci:是.. 04/17 20:44
5F：推 oxoox:可以考慮把denaturing T的時間加長這樣也會有幫助 04/17 21:24
6F：推 vichael:不考慮作Nested PCR嗎 ^^ 04/18 23:37
7F：推 silverberry:是~~ 04/20 13:04