作者dropdred (keep the faith)
看板Biotech
标题[问题] PCR夹GC rich region
时间Tue Apr 17 18:29:39 2007
最近在夹GC rich的位置,约80%
amplicon约650bp
primer是用primer3设计的,Tm=60度
试过AmpliTaq, 在60度跟touchdown会夹出约300bp的片段
但在升温上去68度就什麽都没有了...连残存的primer都看不见
另外,还试了AmpliTaq Gold
更惨,不论是60, 65, 68度
什麽都没有...整块胶只有marker
想请问大家的经验....感激不尽!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.228.195.21
1F：推 aggaci:加betaine 1M，我加了就P出来了！！亲身经历 04/17 18:51
2F：推 silverberry:加 1% DMSO 也 p出来过~~P 2.5 K 的!! 04/17 18:52
3F：推 dropdred:请问上述所说的是最终浓度吗 04/17 19:43
4F：→ aggaci:是.. 04/17 20:44
5F：推 oxoox:可以考虑把denaturing T的时间加长这样也会有帮助 04/17 21:24
6F：推 vichael:不考虑作Nested PCR吗 ^^ 04/18 23:37
7F：推 silverberry:是~~ 04/20 13:04