作者aceym (aceym)
站內Biotech
標題[問題] 關於clone的問題
時間Tue Apr 17 18:13:21 2007
我最近一直在做clone
,insert 是primer放大genome, DNA再用restriction enzyme去切 ,
Transformation完後,用PCR check colony.
再抽mini prep->PCR check ->電泳
問題來了,我挑colony和第一次mini prep跑完電泳都會有很粗的band
我第二次再抽mini-prep ->PCR check ->電泳-----跑出來的band 非常的淡,幾乎是沒有
我第二次抽的mini-prep,菌是第一次mini-pre凍的,我想說會不會是凍菌的問題
(80%glycerol)
於是我再從LB agar 挖菌去種->再抽mini prep->PCR check ->電泳-----跑出來的band比
較清楚,但依然很淡….我實在不知道什麼?那段insert 怎麼會那麼快從plasmid 內消失?
請問有人有遇過這樣的問題嗎?
我已經clone 兩次,結果都是一樣,請各位大大幫幫我
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.172.53.214
1F：推 janmei:你已經抽mini了 建議用enzyme切 來確定 比較準確 04/20 10:17