作者aceym (aceym)
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标题[问题] 关於clone的问题
时间Tue Apr 17 18:13:21 2007
我最近一直在做clone
,insert 是primer放大genome, DNA再用restriction enzyme去切 ,
Transformation完後,用PCR check colony.
再抽mini prep->PCR check ->电泳
问题来了,我挑colony和第一次mini prep跑完电泳都会有很粗的band
我第二次再抽mini-prep ->PCR check ->电泳-----跑出来的band 非常的淡,几乎是没有
我第二次抽的mini-prep,菌是第一次mini-pre冻的,我想说会不会是冻菌的问题
(80%glycerol)
於是我再从LB agar 挖菌去种->再抽mini prep->PCR check ->电泳-----跑出来的band比
较清楚,但依然很淡….我实在不知道什麽?那段insert 怎麽会那麽快从plasmid 内消失?
请问有人有遇过这样的问题吗?
我已经clone 两次,结果都是一样,请各位大大帮帮我
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◆ From: 218.172.53.214
1F：推 janmei:你已经抽mini了 建议用enzyme切 来确定 比较准确 04/20 10:17