作者andyz (像笨蛋一樣)
看板Biotech
標題[問題] RT-PCR
時間Tue Apr 17 12:02:03 2007
查了一下前文,沒有問到類似的問題,請教版上前輩
設計了一組primer, forward tm 57.4, reverse tm 56.6 長度都是 22 mer
PCR product為188 bp
用pcr 去夾genome DNA確定可以夾出一個很亮的band,大小也正確
可是當做RT-PCR想去夾該基因的時候 卻出現兩個band
一個為 188 bp比較弱, 一個為約260~270 bp 較亮
想了很久不知道有什麼原因會這樣
cycle 為 95度 30秒 54度 10秒 68度 15秒
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.151.142
1F：推 lakerjackt:你的primer設計不好,導致cDNA裡頭有別的序列夾出來 04/17 12:34
2F：推 andyz:可是我有用primer 所夾出的sequence去 blast原來的genome 04/17 13:46
3F：→ andyz:並沒有against 其他片段 04/17 13:47
4F：推 lakerjackt:但你有沒有去check你的DNA->RNA時,有新的序列出現,懂嗎 04/17 15:04
5F：→ lakerjackt:因為轉錄後要除去intron..就有可能有新的連續序列 04/17 15:06
6F：推 andyz:謝謝前輩的回答喔！只是我現在做的是E.coli~ 04/17 15:31
7F：→ andyz:恩～ 我再想想看 轉cDNA時 是否有可能出現不一樣的序列 04/17 15:31
8F：推 lakerjackt:建議你去做sequecing,因你的是原核cell,所以有可是.. 04/17 15:55
9F：→ lakerjackt:pcr產物自己黏在一起,再做pcr...才導致大片段 04/17 15:56