作者andyz (像笨蛋一样)
看板Biotech
标题[问题] RT-PCR
时间Tue Apr 17 12:02:03 2007
查了一下前文,没有问到类似的问题,请教版上前辈
设计了一组primer, forward tm 57.4, reverse tm 56.6 长度都是 22 mer
PCR product为188 bp
用pcr 去夹genome DNA确定可以夹出一个很亮的band,大小也正确
可是当做RT-PCR想去夹该基因的时候 却出现两个band
一个为 188 bp比较弱, 一个为约260~270 bp 较亮
想了很久不知道有什麽原因会这样
cycle 为 95度 30秒 54度 10秒 68度 15秒
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.151.142
1F：推 lakerjackt:你的primer设计不好,导致cDNA里头有别的序列夹出来 04/17 12:34
2F：推 andyz:可是我有用primer 所夹出的sequence去 blast原来的genome 04/17 13:46
3F：→ andyz:并没有against 其他片段 04/17 13:47
4F：推 lakerjackt:但你有没有去check你的DNA->RNA时,有新的序列出现,懂吗 04/17 15:04
5F：→ lakerjackt:因为转录後要除去intron..就有可能有新的连续序列 04/17 15:06
6F：推 andyz:谢谢前辈的回答喔！只是我现在做的是E.coli~ 04/17 15:31
7F：→ andyz:恩～ 我再想想看 转cDNA时 是否有可能出现不一样的序列 04/17 15:31
8F：推 lakerjackt:建议你去做sequecing,因你的是原核cell,所以有可是.. 04/17 15:55
9F：→ lakerjackt:pcr产物自己黏在一起,再做pcr...才导致大片段 04/17 15:56