作者DreamShop (夢想專賣店)
看板Biotech
標題Re: [求救] 關於Cy5的發光機制
時間Fri Apr 13 03:15:17 2007
※ 引述《amnesiachick (;l;l)》之銘言：
: 有幾個跟Cy5有關的問題 希望知道的人能夠給點指點^^
: Red laser light that produces fluorescent emission from Cy5 can also
: switch the dye to a stable dark state. Exposure to green laser light
: converts Cy5 back to the fluorescent state, but the recovery rate
: depends critically on the close proximity of a secondary dye, Cy3.
: 主要是有關這一段的問題.在看到這篇paper以前我認知中的Cy5是照紅光就會亮,
: 然後就一直亮到它photobleach為止.所以我看不懂為什麼red laser會
: "switch the dye to a stable dark state".而且這裡green laser的存在目的是什麼呢?
: 如果不照green laser, 一直照red laser, Cy5就不會再亮了嗎?
: "green laser light converts Cy5 back to the fluorescent state",
: fluorescent state不是指excited state嗎?可是在paper裡面照綠光的
: 時候是沒有emission的. 這幾部分我真的很疑惑.
: 另外請問Cy3跟Cy5之間的距離會影響recovery state的問題,這應該從哪個角度去解釋呢?
: 因為我查相關資料,裡面也只是提到這個現象,但並沒有詳細解釋為什麼?
: 拜託大家了^^
這篇的意思似乎是將cy3和cy5結合在一起
先用紅光quench掉cy5 (dark state)
再用綠光激發cy3 讓cy3經由FRET去激發cy5
這個過程是隨機的(stochastic)
因為大部分的cy5已經被quench
而cy3誘發的cy5又是隨機的 所激發的cy5很少
因此可以達到single molecular imaging
ps.(quench 跟 irreversible bleach定義上應該不一樣)
ps2. 這概念感覺有點像 stimulated emission depletion (STED) microscopy
ps3.很貴
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 128.120.141.116
1F：推 nightcatman:不, 不是FRET, 請看ref[14]第一頁最後"We note.."那句 04/13 03:19
2F：推 nightcatman:另外ref[14]裏也有說到,他們知道Cy3的存在可以增加Cy5 04/13 03:25
3F：→ nightcatman:switch back的機率,但Fig4(b)顯示這並不是因為FRET而 04/13 03:26
4F：→ nightcatman:是有其他的原因 04/13 03:27
5F：推 oplz:果然是莊小威那一篇, 這技術沒甚麼實用價值..其實成本還好 04/13 11:48
6F：→ oplz:可參考 palm, 基本上是同樣的技術 兩者同時發表. 04/13 11:49
7F：推 oplz:還有這跟 STED 完全不一樣, STED 是同時在 sample 的上下照 04/13 11:54
8F：→ oplz:想法很厲害 但很難用..專利還在申請中 所以買不到. 04/13 11:55
9F：→ oplz:STORM/PALM 只是拿訊號的最中心做標定, 分次把整個 sample 照 04/13 11:56
10F：→ oplz:完而已..對 fix sample 都得照個一天, 沒啥用處.. 04/13 11:58
11F：→ oplz:因為還沒商業化,據說估計 STED 一台要六百萬美金 , 你會買嗎? 04/13 12:00
12F：推 oplz:sorry, 打錯 (STED 是紅綠光同時在 sample 的上方照) 04/13 12:05
13F：推 DreamShop:莊小威?? 這名字挺好笑的... 04/13 16:18
14F：推 amnesiachick:名字好笑 可是人很厲害 =.=+ 04/13 17:11