感謝各位板友的熱心回答，感動。 我目前是用Lipofectamine 2000 想把pSuper 送進細胞做knock-down， 我學長之前是用RNA duplex，一樣是用Lipofectamine 2000， 所以看了產品說明之後，很好奇為什麼一樣是用Lipo 2000， 送DNA 和送RNA 所需的cell density 不一樣， 之前a大說用Lipo2000 送DNA很毒，那送RNA不會嘛？ Lipo2000 送DNA 和 RNA 的毒性不一樣喔？ 有點不懂說... 其實這就是我主要好奇的地方啦！ 不過我家的Lipo2000 是才剛新買的， 也不好馬上又買另一種用啦！所以只有繼續用Lipo2000送我的pSuper， 不過我的pSuper沒有mammalian selection marker， 所以transfect進去後，很難知道到底transfection efficiency 是多少， 目前只能用ImageJ 一個一個量signal intensity， 看有沒有減少，之前有說用WB，但是我學長試過， 我們的Ab做WB效果很不好，需要大量的蛋白質， 才能在WB顯現出來，做immunostaining的dilution也要到1:50， 不像平常的Ab，1:100-1:500之間都okay。 所以才想問問有沒有其他辦法的。 之前有看到一篇paper，它也沒有用drug selection， transfect 隔天就把cell dilute 到lower density， 然後再放個2-4 days，用WB測出來的k/d是50-70%。 結果這兩天我用GFP-tagged protein試試看， 看看這樣做transfection efficiency 是多少， (用GFP-tagged 是因為比較好觀察) 結果把細胞dilute 到lower density 隔天， 發現死好多喔！ 反而transfect 的隔天，就是split cells 之前， 死的細胞只有一點點，dilute 之後卻死一堆。 不過這些到時候用顯微鏡看就知道存活的有多少是transfected 成功的， 我比較煩惱的是-- 要是我用pSuper 下去，又沒有drug selection， 到時後我怎知道存活的有沒有k/d 成功，efficiency 是多少， 又，哪些cells 是k/d 成功的。 苦惱阿～ 對了，想問一下，我的pSuper 其他實驗室給的， 他們用RT-PCR 測是：transfect 三天後，mRNA有明顯減少， 這樣的話，蛋白質也是三天嘛？還是要比三天長？ 之前有板友說看蛋白質的turn over 是多久， 可是我不知道我的蛋白質是多久， 在沒有drug selection 的情況下， 不知道我的細胞要是放6-9天， 存活的會剩多少是有成功transfected 的。~~>.<~~ -- 　　夢想和現實是有距離的。 　　一切都將重新開始.... --

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