感谢各位板友的热心回答，感动。 我目前是用Lipofectamine 2000 想把pSuper 送进细胞做knock-down， 我学长之前是用RNA duplex，一样是用Lipofectamine 2000， 所以看了产品说明之後，很好奇为什麽一样是用Lipo 2000， 送DNA 和送RNA 所需的cell density 不一样， 之前a大说用Lipo2000 送DNA很毒，那送RNA不会嘛？ Lipo2000 送DNA 和 RNA 的毒性不一样喔？ 有点不懂说... 其实这就是我主要好奇的地方啦！ 不过我家的Lipo2000 是才刚新买的， 也不好马上又买另一种用啦！所以只有继续用Lipo2000送我的pSuper， 不过我的pSuper没有mammalian selection marker， 所以transfect进去後，很难知道到底transfection efficiency 是多少， 目前只能用ImageJ 一个一个量signal intensity， 看有没有减少，之前有说用WB，但是我学长试过， 我们的Ab做WB效果很不好，需要大量的蛋白质， 才能在WB显现出来，做immunostaining的dilution也要到1:50， 不像平常的Ab，1:100-1:500之间都okay。 所以才想问问有没有其他办法的。 之前有看到一篇paper，它也没有用drug selection， transfect 隔天就把cell dilute 到lower density， 然後再放个2-4 days，用WB测出来的k/d是50-70%。 结果这两天我用GFP-tagged protein试试看， 看看这样做transfection efficiency 是多少， (用GFP-tagged 是因为比较好观察) 结果把细胞dilute 到lower density 隔天， 发现死好多喔！ 反而transfect 的隔天，就是split cells 之前， 死的细胞只有一点点，dilute 之後却死一堆。 不过这些到时候用显微镜看就知道存活的有多少是transfected 成功的， 我比较烦恼的是-- 要是我用pSuper 下去，又没有drug selection， 到时後我怎知道存活的有没有k/d 成功，efficiency 是多少， 又，哪些cells 是k/d 成功的。 苦恼阿～ 对了，想问一下，我的pSuper 其他实验室给的， 他们用RT-PCR 测是：transfect 三天後，mRNA有明显减少， 这样的话，蛋白质也是三天嘛？还是要比三天长？ 之前有板友说看蛋白质的turn over 是多久， 可是我不知道我的蛋白质是多久， 在没有drug selection 的情况下， 不知道我的细胞要是放6-9天， 存活的会剩多少是有成功transfected 的。~~>.<~~ -- 　　梦想和现实是有距离的。 　　一切都将重新开始.... --

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